Barwienie preparatów przy pomocy Oil Red
Ostatnio próbowałem wybarwić kropelki tłuszczu w zarodnikach przy pomocy mieszanki Oil Red (Sudan III i IV w acetonie). Efekty można zobaczyć poniżej:
Na fotce Cookeina speciosa, mikroskop z DIC.
Dodatkowo preparat dobarwiony Cotton Blue.
Mam problem jeszcze z równomiernym wybarwieniem wszystkich zarodników, oczywiście najłatwiej wybarwiają się te uszkodzone. Wycinki hymenoforu trzymałem w tej mieszance przez całą noc, do tego jeszcze dosyć długo to podgrzewałem (kilka razy trzeba ten aceton doprowadzić do wrzenia).
Jeszcze trochę z tym będę eksperymentował, na razie wracam do nauki, bo w trakcie sesji jestem: D
W jasnym polu to wygląda tak:
Barwi większośc związków lipidowych, lipoproteiny, triglicerydy itp.
Grzyby mają tego całkiem sporo, w samych strzępkach też :)
Wadą sudanu jest to, że może być rakotwórczy (zresztą jak większośc tych brawników, których używamy;P), więc trzeba uważać.
Jeszcze dla porównania - takie same zarodniki, barwione samym Cotton Blue, też DIC.
Niezłe! Podoba mi się jakość tych zdjęć mikroskopowych! Powinienem wiedzieć, co to takiego "Sudan III i IV w acetonie"?
Dzięki, starałem się :)
Sudany i czerwień oleista to takie barwniki diazowe. Oil Red to właściwie nie mieszanka, tylko osobny związek, ale my mamy w labie taką mieszankę dwóch-trzech, bo (chyba) jest bardziej skuteczna, no i poprzez skrót myślowy nazywa się to Oil Red'em;)
Kupić można bardzo łatwo.
Barwienie jest dosyć trudne, samo moczenie w roztworze barwiącym nie wystarczy. Może sobie to tak leżeć całą noc i się nie wybarwi jak trzeba. Najlepiej wcześniej rozluźnić czymś ściany komórkowe, na przykład jakimś niskim stężeniem KOH, potem to wylać i zalać preparat sudanem w acetonie. Podgrzewać kilka razy, aż aceton zacznie lekko wrzeć. Potrzymać trochę w wyższej temperaturze.
Ja to barwiłem właśnie w taki sposób, skrawki grzyba trzymając w eppendorfie (lepiej używać małej szklanej probówki, ale nie miałem pod ręką). Potem oczywiście kawałki grzyba trzeba wyjąć w jakiś sposób i wypłukać nadmiar barwnika. Oczywiście można wtedy to robić wodą, bo w mieszaninie aceton-woda też się rozpuszczają.
Wygląda to bardzo dobrze. Nawet w samym cotton blue. Ot nowoczesny mikroskop z DIC. Napisz jaki to mikroskop używałeś i coś więcej o tym mikroskopie (obiektywy, kondenser itd).
Nikon Eclipse E800, dosyć stary model, ale wzbogacony właśnie o DIC :)
Używałem obiektywów DICH (100x) i DICM (40x), kondensor uniwersalny C-CU.
Układ zbliżony do tego tutaj:
Pracowałem już na kilku mikroskopach tej serii i muszę powiedzieć, że są bardzo miłe w obsłudze :)
Wiesz może jakie są proporcje sudanu III do sudanu IV w tej mieszance?
Trzymamy się tematu forum. Nie drażnimy się. Ma być miło :) ⇒ szerzej o zasadach i coś jak regulamin